因为梨树感染病毒后,毕生带毒,耐久损害,无法用药剂医治; 并且绝大多数梨树病毒在**条件下未发现传毒介体,首要经过 嫁接感染。因而,培育无病毒母本树,培育无病毒苗木是防治梨树 病毒病的根本措施。培育梨无病毒母本树的办法首要有3种,即 热处理脱毒、茎尖培育脱毒和茎尖培育结合热处理脱毒。
(1)热处理脱毒技能
①热处理脱毒技能原理37T:〜38T:高温可以按捺病毒增殖及病毒在梨苗体内分散,梨苗自身在该温度条件下仍可以成长,因 此可利用病毒和寄主植物对髙温忍耐性的差异,使植物的成长速 度追赶病毒的分散速度,得到一小部分不含病毒的新梢然后到达 脱除病毒的意图。
②热处理脱毒办法春季取待脱毒种类接穗切接于盆栽实生 杜梨砧木上,翌年2月上中旬将该盆栽苗移人温室,待苗木萌发 后,放人热处理箱中(可设恒温文变温2种处理)。恒温热处理,温 度控制在371 士IX:,处理时刻为28〜30天>变温热处理,温度为 32t和38*C每隔8小时改换1次,处理时刻为60天。处理完毕 后从该盆栽苗上剪取0. 8〜1厘米嫩梢,劈接或皮下接于盆栽实生 杜梨砧木嫩梢上,套小塑料袋保湿,前1〜2周遮荫,待成活后去掉 塑料袋并移入田间进行检测。
因为热处理脱毒法要求的设备条件比较简单,脱毒操作比较 简单,因而使用较早,也较广泛,但该技能的脱毒功率较低。温度 和时刻是影响热处理脱毒法脱毒作用的两个较首要的要素. Bhardwa丨等发现,在热空气处理进程中,温度越高、时刻越长,脱 毒作用就越好,可是一起植物的生存率却呈下降趋势。因而,温度 挑选时应统筹脱毒作用和植物耐热性。洪霓等(1995)在梨病毒脱 除研讨中选用了 2种处理,一是恒温处理,温度控制在37°C 士 1°0»二是变温处理,32X:和38*0每隔8小时改换一次^变温热处 理具有处理进程中植株死亡率低和脱毒率较高的特色,而恒温热 处理嫩梢嫁接成活率较高。因而,在实践使用中应根据具体情况 挑选办法。该法对嫩梢嫁接技能要求较高,所取嫩梢越短脱毒率 越高,但嫁接成活率亦越低,故一般嫩梢长度以0. 8〜1厘米为宜。 洪霓等(1995〉研讨结果表明,选用热处理法可以脱除梨脉黄病毒、 梨环纹花叶病毒和榲梓矮化病毒,但苹果茎沟病毒较难脱除,其脱 毒率为恒温热处理47.1 %、变温热处理64. 3%。
①茎尖培育脱毒技能的原理茎尖培育脱毒的原理是:植物 体内病毒靠维管束体系移动,分生组织中没有维管束存在,病毒只 能靠胞间连丝移动,速度很慢,难以追上成长活泼的分生组织,所 以旺盛成长的根尖、茎尖一般都无病毒或很少有病毒散布。植物 体不含病毒的部分很小,一般不追赶0. 5毫米,切取0. 5毫米以下 巨细的茎尖进行培育才可以脱除病毒。
②茎尖培育脱毒办法在梨树新梢成长较快的时期(我国北 方为5月中下旬),收集成长旺盛、长2〜3厘米的**梢,先用流水 冲刷5〜10分钟,去掉小叶,乙酵浸泡0.5分钟,蒸馏水冲刷后放 入0.1%升汞中消毒5〜10分钟,无菌水浸洗3〜5次,取出后在 解剖镜下敏捷剥取0. 2〜0. 5毫米巨细的茎尖,接种在MS附加 BA(0. 5〜1.5 毫克/升)、IBA(0.1〜0. 3 毫克/升)、GA3(0. 2〜8. 5毫克/升)、琼脂(5. 5克)及蔗糖(30克)的培育基上进行别离 培育。培育成活后的试管苗按芽编号,经繁衍,生根移栽或直接嫩 梢嫁接在实生砧木上后,移人田间,进行病毒检测。
茎尖培育脱毒较首要的影响要素是茎尖巨细。一般要求茎尖 长度小于0. 5毫米。一般切取茎尖越小,脱毒作用越好,可是茎尖 培育成活率变低。为此,现在多将热处理与茎尖培育相结合,以获 得较抱负的脱毒和分解作用。
(2) 茎尖培育结合热处理脱毒技能
①原理热处理与茎尖培育相结合之所以可以提髙脱毒效 果,是因为热处理按捺了病毒繁衍分散速度,使植物自身所具有的 **区扩展,然后有利于切取较大的茎尖,提髙培育成活率和 脱毒功率。
②脱毒办法热处理与茎尖培育相结合的脱毒办法有2种。
热处理后茎尖培育《从恒温或变温热处理后的盆苗上取嫩梢,剥取1〜1. 5毫米茎尖进行别离培育,消毒进程和培育基闻茎尖培育脱毒。
试管苗热处理:将待脱毒试管苗转接后,在常温下(25*C)继代 培育15天,置恒温培育箱中(32D培育1周,然后升温至37V热 处理20〜50天,剥取1毫米茎尖培育。
(4>其他脱毒技能除上面介绍的3种脱毒技能以外,还有微 嫁接、抗病毒药剂等脱毒技能。关于在离体条件下难于成长发育 或许不易生根的种类,在脱毒时可选用微嫁接的办法,将分生组织 嫁接到试管中繁衍的砧木上,以得到完好的脱毒植株。将抗病毒 化学药物,如三氮唑核苷(病毒唑)、5-二氢尿嘧啶(DHT)、双乙酰- 二氢-5-氮尿嘧啶等,直接注射到带病毒的植株上,或许加到植株 成长的培育基上,再切取茎尖进行组织培育,可进步脱毒率和成活 率,罗晓芳等(1的6)在培育基中加人病毒唑,脱除了 2种苹果潜 隐病毒。这些办法现在在梨树脱毒中还少有使用。